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分子生物学工具酶 >DNA Rapid Ligation Kit
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货号

规格

价格

#M0231

30

600.00元

#M0232

150

2,400.00元

概述:
 
DNA快速连接试剂盒显著缩短了DNA连接反应的时间。在室温 (25°C) 条件下,使用DNA快速连接试剂盒,5分钟即可完成DNA片段粘性末端或平滑末端的连接反应。
 
应用:
1. 载体构建。
2. 文库构建。
3. TA克隆。
4. Linker的连接。
5. 线形DNA的再环化。
 
质量检测:
 
本产品已按下述步骤检测转化效率:
pET28a载体经EcoRV消化 (平滑末端) 或HindIII消化 (粘性末端) 后,CIP处理,回收纯化。
pBR322 DNA经HaeIII消化产生的平滑末端插入片段和λDNAHindIII消化产生的粘性末端插入片段,采用快速连接步骤,分别以3 : 1 (插入片段 : 载体) 的比例与同样酶切的pET28a载体相连接。连接产物的转化方法 (详见下文)。
每批产品检验均达到下面的标准:
  转化效率 (转化子/μg)
  载体再环化 插入片段的连接
粘性末端 >5×106 >1×106
平滑末端 >2×106 >1×106
未切割载体 2×107  
 
质保声明:
 
DNA快速连接试剂盒经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。
 
快速连接步骤:
 
1. 混合50 ng载体和3倍摩尔量的插入片段,用蒸馏水调整总体积为10 μl
2. 加入10 μl 2× 快速连接酶反应缓冲液,混匀。
3. 加入1 μl快速T4 DNA连接酶,彻底混匀。
4. 室温 (25°C) 作用5分钟。
5. 冰上冷却,然后转化或贮存于-20°C
6. 不要热失活,热失活会急速剧降低转化效率。
 
转化步骤:
 
快速连接产物可通过几种不同的方法进行转化,推荐转化方法如下:
1. 冰上融化感受态细胞。
2. 1.5 ml微量离心管中,冷却约5 ng (2 μl) 的连接混合物。
3. DNA样品中加入50 μl感受态细胞,通过反复吹吸温和混匀样品。
4. 冰上放置30分钟。
5. 42°C热休克30秒*,冰上冷却2分钟。
6. 加入950 μl室温培养基*,37°C温育1小时。
7.100 μl样品铺在适宜的固体培养基上。
8. 37°C培养过夜。
[*]:热休克的时间和温度以及复苏的过程请遵循感受态细胞说明书。
文档下载

DNA快速连接试剂盒.pdf(如无法打开,请使用“右键另存为”保存说明书。)

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