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分子生物学工具酶 >Klenow Fragment (3′→5′exo-)
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货号

规格

浓度

价格

#M0211

200 U

5,000 U/ml

165.00

#M0212

1,000 U

5,000 U/ml

660.00

概述:
 
Klenow片段 (3´→5´exo-) 是大肠杆菌DNA聚合酶I的蛋白水解物。该酶保留了DNA聚合酶活性但失去了5´→3´核酸外切酶活性。该酶经突变 (D355A,E357A) 去除了其3´→5´核酸外切酶活性(1)
 
来源:
 
重组E.coli菌株,该菌株的质粒上携带有E.colipolA基因的片段,该基因经突变 (D355A,E357A),以密码子324为起始位点。
 
应用:
 
1. 随机引物探针的合成。
2. 双脱氧法DNA序列测定(Sanger法)(2)
3. 合成cDNA第二条链(3)
 
反应条件:
 
1× Klenow片段 (3´→5´ exo-) 反应缓冲液[10 mM Tris-HCl (pH 7.9 @ 25°C),50 mM NaCl,10 mM MgCl2,1 mM DTT],添加dNTPs (不随酶附赠),37°C温育。
 
质量检测:
 
核酸内切酶活性:50 μl反应体系中,50 U本酶与1 μgpUC19质粒于37°C温育4小时,<10%pUC19质粒由超螺旋变为缺刻状态。
核酸外切酶活性:50 μl反应体系中,50 U本酶与1 μgHind III消化的λDNA37°C温育4小时,电泳条带无明显变化。
纯度:经SDS-PAGE (考马斯亮蓝染色) 检测其纯度大于95%
 
质保声明:
 
Klenow片段 (3´→5´exo-)聚合酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。
 
单位定义:
 
1单位指在37°C条件下,反应30分钟能使10 nmoldNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需的酶量。
 
参考文献:
 
1. Derbyshire, V. et al. (1988) Science, 240, 199-201.
2. Sanger, F. et al. (1977) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 74, 5463-5467.
3. Gubler, U. (1987) Methods Enzymol,152, 330-335.
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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