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分子生物学工具酶 >T4 Polynucleotide Kinase
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货号

规格

浓度

价格

#M0101

200U

10,000U/ml

180.00

#M0102

1,000U

10,000U/ml

720.00

概述:
 
T4多聚核苷酸激酶能够催化磷酸基团在ATPγ-位和寡核苷酸链 (双链或单链DNARNA) 的5´-羟基末端以及3´-单磷酸核苷间进行转移和交换。该酶还具有磷酸酶活性,将3´-磷酸基团从寡核苷酸的磷酸末端、脱氧3´-单磷酸核苷和脱氧3´-二磷酸核苷上水解掉。
 
来源:
 
重组E. coli菌株,克隆有T4多聚核苷酸激酶基因(1)
 
应用:
 
1. DNARNA末端磷酸化,以便进行连接反应。
2. DNARNA探针的末端标记,进行DNA测序(2)
3. 去除核苷酸等的磷酸基团(3)
 
反应条件:
 
1× T4多聚核苷酸激酶反应体系含:1× T4多聚核苷酸激酶反应缓冲液 [70 mM Tris-HCl (pH 7.6 @ 25°C),10 mM MgCl2,5 mM DTT],37°C温育。
 
质量检测:
 
核酸外切酶活性:50 μl反应体系中,300 U本酶与1 μgHind III消化的λDNA37°C温育4小时,电泳条带无明显变化。
核酸内切酶活性:50 μl反应体系中,200 U本酶与1 μg的pUC19质粒于37°C温育4小时,<10%的pUC19质粒由超螺旋变为缺刻状态。
RNase活性:50 μl反应体系中,100 U本酶与250 ng的大肠杆菌rRNA37°C温育2小时,经琼脂糖电泳检测,被降解的rRNA小于1%
其他酶活性:50 µl反应体系中,50 U本酶在37°C条件下与羟基末端磷酸化的d(T)8反应,经BIOMOL GreenTM试剂显色后分光光度计检测,少于1%的产物被磷酸酶降解。
纯度:经SDS-PAGE (考马斯亮蓝染色) 检测其纯度大于95%
 
质保声明:
 
T4多聚核苷酸激酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。
 
单位定义:
 
1单位即1Richardson单位,指37°C条件下,30分钟内催化1 nmol酸不溶性[32P]掺入所需要的酶量(1)
 
参考文献:
 
1. Richardson, C.C. (1981). P.D. Boyer (Eds.), The Enzymes, Vol. 14, (pp. 299-314). San Diego: Academic Press.
2. Sambrook, J. et al. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (2nd ed.), (pp 10.59-10.67, 11.31-11.33). Cold Spring Harbor:   Cold Spring Harbor Laboratory Press.
3. Cameron, V. and Uhlenbeck, O.C. (1977). Biochemistry, 16, 5120-5126.
4. Berkner, K.L. and Folk, W.R. (1977) J. Biol. Chem., 252, 3176-3184.

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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