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分子生物学工具酶 >T4 DNA Ligase
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货号

规格

浓度

价格

#M0081

20,000 U

400,000 U/ml

200.00

#M0082

100,000 U

400,000 U/ml

800.00

概述:
 
该酶催化契合的双链DNARNA5´-磷酸末端和3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑末端或粘性末端DNA之间的连接,还可以修复双链DNA、RNADNA/RNA杂交双链中的单链切口(1)
 
来源:
 
纯化自重组E. coli菌株。
 
应用:
 
1. 限制性酶切片段的克隆(2)
2. linkeradaptor连接到DNA片段的平滑末端。
 
反应条件:
 
1× T4 DNA连接酶反应缓冲液 [50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25°C),10 mM MgCl2,10 mM DTT,1 mM ATP],16°C温育。
 
质量检测:
 
核酸外切酶活性:50 µl不含ATP的反应体系中,3,200 U本酶与1 µgHind III消化的λDNA37°C下温育4小时,DNA的电泳条带无明显变化。
核酸内切酶活性:50 µl不含ATP的反应体系中,3,200 U本酶与1 µgpUC19质粒于37°C下温育4小时,<5%pUC19质粒由超螺旋变为缺刻状态。
纯度:经SDS-PAGE (考马斯亮蓝染色) 检测其纯度大于95%
 
质保声明:
 
T4 DNA连接酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。
 
单位定义:
 
(粘性末端连接活性定义)
20 μl T4 DNA连接酶反应体系中,0.12 μM 5‘末端浓度,16°C反应30分钟,能使50%Hind III消化的λDNA片段连接所需的酶量定义为一个活性单位。
 
热失活:
 
65°C温育10分钟即可失活。
 
参考文献:
 
1. Engler, M.J. and Richardson, C.C. (1982). In P.D. Boyer (Ed.), The Enzymes Vol. 5, (p. 3). San Diego: Academic Press.
2. Sambrook, J., et al. (2001). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (3rd ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press.
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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