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分子生物学工具酶 >DNA Polymerase I Large Fragment (Klenow)
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货号

规格

浓度

价格

#M0021

200 U

5,000 U/ml

165.00

#M0022

1,000 U

5,000 U/ml

660.00

概述:
 
DNA聚合酶I (Klenow) 大片段是大肠杆菌DNA聚合酶I的蛋白水解物,该酶具有DNA聚合酶活性和3′→5′核酸外切酶活性,但失去了5′→3′核酸外切酶活性,该酶不会降解5′末端DNA,同时保留了高保真的聚合酶活性(1)
 
来源:
 
来源于重组E.coli菌株,该菌株含有DNA聚合酶I大片段 (Klenow) 基因的表达载体。
 
应用(2)
 
1. 双脱氧法DNA序列测定 (Sanger法)。
2. 5′突出末端的补平,形成平末端。
3. 3′突出末端的切除,形成平末端。
4. 合成cDNA第二条链。
5. 随机引物的标记。
6. 诱变反应中第二条链的合成。
 
反应条件:
 
1× Klenow反应体系含:1× Klenow反应缓冲液[25 mM Tric-HCl (pH 7.4 @ 25°C),0.1 mM EDTA,1 mM Dithiothreitol (DTT),50%甘油 (V/V)],添加dNTPs (不随酶附赠),37°C温育。
 
质量检测:
 
核酸内切酶活性:50 μl反应体系中,50 U本酶与1 μgpUC19质粒于37°C温育4小时,电泳条带无明显变化。
纯度:经SDS-PAGE (考马斯亮蓝染色) 检测其纯度大于95%。 
 
质保声明:
 
DNA聚合酶I (Klenow) 大片段经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。
 
单位定义:
 
1单位指在37°C条件下,反应30分钟能使10 nmoldNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需的酶量。
 
参考文献:
 
1. Jacobsen, H. et al. (1974). The N-terminal amino-acid sequences of DNA polymerase I from Escherichia coli and of the large and the small fragments obtained by a limited proteolysis. Eur. J. Biochem. 45:623-627.
2. Sambrook, J. et al. (2001). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (3rd ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press.
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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DNA聚合酶Ⅰ (Klenow) 大片段.pdf(如无法打开,请使用“右键另存为”保存说明书。)

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