分子生物学工具酶

 

Pfu DNA聚合酶

 

编号:  M0012

规格:  2.5U/μL

包装:  500μL(1250U)

价格(¥):  

产品介绍:  Pfu DNA聚合酶是从克隆有Pyrococcus furiosus DNA聚合酶基因的大肠杆菌中分离出来的。Pfu DNA聚合酶有3´→5´外切酶的活性,它能纠正DNA扩增过程中产生的错误,是目前已发现的所有天然耐热DNA聚合酶中出错率最低的(1)

来源:  携带有Pyrococcus furiosus基因的E. coli菌株。(2)

应用:

1. 常规PCR。

2. 基因的高保真PCR,克隆和表达。

3. 反转录PCR (RT-PCR)。

4. 平末端PCR克隆。

5. 定点突变。

反应条件:   μl反应体系中含有:1× μ μ

质量检测:

核酸外切酶活性:  50μl反应体系中,10 U本酶与0.2 mM dNTPs和1 μgHind III消化的λDNA于37°C温育4小时,电泳条带无明显变化。

核酸内切酶活性:  50μl反应体系中,10 U本酶与0.2 mM dNTPs和1 μg的pUC19质粒于37°C温育4小时,电泳条带无明显变化。

纯度:  经SDS-PAGE(考马斯亮蓝染色) 检测其纯度大于95%。

  50 μl反应体系,10× Pfu DNA聚合酶反应缓冲液 (包括20 mM MgSO4) [ 200 mM Tris-HCl (pH 8.8 @ 25°C),100 mM (NH4)2SO4,100 mM KCl,1 mg/ml,无核酸酶活性的BSA,1% Triton X-100  (V/V),20 mM MgSO4]。

20 kb λDNA PCR扩增:  50 μl反应体系,1× Robust fusion HF缓冲液,10 ng λDNA,1 U Robust fusion DNA聚合酶,200 μM dNTPs和1 μM引物,22个循环PCR扩增出20 kb目的片段。

质保声明:  Pfu DNA聚合酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。

单位定义:  在72°C下反应30分钟,能催化10 nmol的dNTPs聚合为多核苷酸片段的酶量定义为1个活性单位(U)。

参考文献:

1.Lunberg, K.S. et al. 1991. High-fidelity amplification using a thermostable DNA polymerase isolated from Pyrococcus furiosus. Gene. 108:1-6.

2.Sambrook, J. et al. 2001. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (3rd ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press.

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